Lycée Paul Éluard | PROCÉDURE | RÉF : M2002 | ||
M2002 ONPG Hydrolase | Création date | |||
Rédacteur : TANDIA Khagny | Vérificateur : | Approbatrices : | ||
Date : 23/03/2010 | Date : Visa | Date : Visa | ||
Objet
Test ONPG hydrolase.
Principe et technique
Introduction.
Il est un des premiers tests enzymatiques réalisés en pratique courante. L’enzyme rechercher lors de ce test est la β-galactosidase (hydrolyse les diholoside) mais pour une bactérie donnée la lactate est une β-galactosidase sont identique.
Intérêt de la recherche.
La recherche de la galactosidase explore la présence d’une enzyme utile au métabolisme du lactose. En effet il est nécessaire d’avoir deux principales enzymes pour la transformation en glucose :
Une galactosidase perméase membranaire pour la pénétration du lactose
Une galactosidase qui catalyse son hydrolyse en glucose et galactose
Un micro-organisme peut donc être galactoside perméase + mais galactosidase -. Cette recherche permet donc de scinder deux groupes :
Galactosidase + et galactosidase -.
Principe.
La β-galactosidase hydrolyse tous les β-galactosides y compris le lactose
Parmi les galactoside, ils existent des substrats artificiels dont le produit d’hydrolyse est coloré : c’est le cas de l’ONPG.
Technique
Le test consiste à mettre en présence un petit volume de suspension bactérienne épaisse avec une solution tamponnée ONPG tampon délivrée sous forme d’un disque pré imprégnée ou d’un volume de solution. L’hydrolyse de l’ONPG se manifeste par l’apparition d’une teinte jaune dans la suspension. La galactosidase est une enzyme inductible c’est-à-dire qu’il faut qu’il est présence de lactose. De plus, le test n’est pas parfait car certaines bactéries possèdent une activité ONPG-hydrolase donc :
ONPG hydrolase - : galactosidase-
ONPG hydrolase + : lactase + ou lactase –
| Réactif | Technique | Résultats |
| ONPG Solution a 13,3 mol.l ou disque prêt à l’emploi | Faire une suspension dense en eau distillée stérile. Déposer un disque imprégné d’ONPG Placer au bain d’eau à 37°C durant 30 mn Lire |  |
| Cupule de la galerie API 20E ONPG thio-galactoside | Ensemencer avec de la suspension d’une colonie en eau distillée |
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Historique des modifications de ce texte :
| DATE : | Modifications apportées |
ANCIENNE VERSION
Lycée Paul Éluard | PROCÉDURE (à modifier) | RÉF : type-numéro à mettre | ||
M2002 ONPG Hydrolase | Création date | |||
Rédacteur : sihame | Vérificateur :sihame | Approbatrices :sihame | ||
Date : 23/03/2010 | Date : Visa | Date : Visa | ||
1. OBJET
Reaction enzymatique. le test ONPG est une technique simple fondé sur l'action direct de lenzyme sur l'ortho-nitrophenyl-B-D-galactosidase.2. DÉMARCHE
Prendre une colonie à partir d'un milieu lactosé qu'on met dans le tube à hemolyse afin de realiser une suspention puis on ajoute le disque ONPG si la solution devien de couleur jaune alors ONPG (+) sinon ONPG (-)
réaliser une suspension epaisse de bacteries testée à l'eau distillée
ajouté avec une pince flambée mias refroidie le disque ONPG
incubée a 37 degres pendant 30 minutes
lire
3. BIBLIOGRAPHIE
4. HISTORIQUE
(indiquer dans le tableau les modifications réalisées. Mettre les éléments avec le dernier en HAUT. Respectez le format de date : ANNEE_MOIS_JOUR)
| DATES | |
| 2010_03_13 | Création par : |