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Lycée Paul Éluard
Avenue Jean Moulin
93206 SAINT DENIS

PROCÉDURE

RÉF : M2002

M2002 ONPG Hydrolase

Création date
Version : 1.2
Modification : date

Rédacteur : TANDIA Khagny

Vérificateur :

Approbatrices :

Date : 23/03/2010

Date : Visa

Date : Visa

  Objet

Test ONPG hydrolase.

  1. Principe et technique

  1. Introduction.

Il est un des premiers tests enzymatiques réalisés en pratique courante. L’enzyme rechercher lors de ce test est la β-galactosidase (hydrolyse les diholoside) mais pour une bactérie donnée la lactate est une β-galactosidase sont identique.

  1. Intérêt de la recherche.

La recherche de la galactosidase explore la présence d’une enzyme utile au métabolisme du lactose. En effet il est nécessaire d’avoir deux principales enzymes pour la transformation en glucose :

  • Une galactosidase perméase membranaire pour la pénétration du lactose

  • Une galactosidase qui catalyse son hydrolyse en glucose et galactose

Un micro-organisme peut donc être galactoside perméase + mais galactosidase -. Cette recherche permet donc de scinder deux groupes :

  • Galactosidase + et galactosidase -.

  1. Principe.

La β-galactosidase hydrolyse tous les β-galactosides y compris le lactose

 

 

Parmi les galactoside, ils existent des substrats artificiels dont le produit d’hydrolyse est coloré : c’est le cas de l’ONPG.

 

 

  1. Technique

Le test consiste à mettre en présence un petit volume de suspension bactérienne épaisse avec une solution tamponnée ONPG tampon délivrée sous forme d’un disque pré imprégnée ou d’un volume de solution. L’hydrolyse de l’ONPG se manifeste par l’apparition d’une teinte jaune dans la suspension. La galactosidase est une enzyme inductible c’est-à-dire qu’il faut qu’il est présence de lactose. De plus, le test n’est pas parfait car certaines bactéries possèdent une activité ONPG-hydrolase donc :

  • ONPG hydrolase - : galactosidase-

  • ONPG hydrolase + : lactase + ou lactase –



Réactif

Technique

Résultats

ONPG

Solution a 13,3 mol.l ou disque prêt à l’emploi

Faire une suspension dense en eau distillée stérile.

Déposer un disque imprégné d’ONPG

Placer au bain d’eau à 37°C durant 30 mn

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Cupule de la galerie API 20E

ONPG thio-galactoside

Ensemencer avec de la suspension d’une colonie en eau distillée





Historique des modifications de ce texte :

DATE :

Modifications apportées


ANCIENNE VERSION

 

Lycée Paul Éluard
Avenue Jean Moulin
93206 SAINT DENIS

PROCÉDURE (à modifier)

RÉF : type-numéro à mettre

M2002 ONPG Hydrolase

Création date
Version : 1.2
Modification : date

Rédacteur : sihame

Vérificateur :sihame

Approbatrices :sihame

Date : 23/03/2010

Date : Visa

Date : Visa

1. OBJET

Reaction enzymatique. le test   ONPG  est une technique simple fondé sur l'action direct de lenzyme sur l'ortho-nitrophenyl-B-D-galactosidase.

2. DÉMARCHE

Prendre une colonie à partir d'un milieu lactosé qu'on met dans  le tube à hemolyse afin de realiser une suspention puis on  ajoute le disque ONPG si la solution devien de couleur jaune alors ONPG (+) sinon ONPG (-)

réaliser une suspension epaisse de bacteries testée à l'eau distillée

ajouté avec une pince flambée mias refroidie le disque ONPG

incubée a 37 degres pendant 30 minutes

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3. BIBLIOGRAPHIE

4. HISTORIQUE

(indiquer dans le tableau les modifications réalisées. Mettre les éléments avec le dernier en HAUT. Respectez le format de date : ANNEE_MOIS_JOUR)

DATES 
  
  
  
2010_03_13Création par :