Lycée Paul Éluard Avenue Jean Moulin 93206 SAINT DENIS	Procédure			RÉF : M5001
	Identification d’un bacille Gram – oxydase +			Création : 26_12_2011 Version : 0.I Modifié :
Rédacteur : Slama Sondes		Vérificateur :	Approbateur :
Date : 26_12_2011		Date :	Date :

1.   Objet

·         Identification d’un bacille Gram – oxydase +

2. Protocole d’identification

2.1 Morphologie et caractères d’orientation :

·         Examen microscopique : L’étude se fera sur des colonies prélevées sur gélose ordinaire. Les bactéries Gram - sont mises en évidence par la coloration de Gram (voir procédure M1001), elles apparaissent colorées en rose.

Genre	Vibrio	Aeromonas/Plesiomonas	Pseudomonas
Forme	Bacille, long, fin, incurvé ou droit	Bacille, long, fin et droit	Bacille long et fin
Taille	4-5 µm de long et 0,5 µm d’épaisseur	3-4 µm de long et 0,5-0,7 µm d’épaisseur	3-4 µm de long et 0,6 µm d’épaisseur
Mobilité	Mobile par ciliature polaire	Mobile par ciliature polaire	Mobile par ciliature polaire
Gram	Négatif	Négatif	Négatif
Coloration	Homogène ou pâle	Homogène ou bipolaire	Homogène, bipolaire ou tigré
Sporulation	Non sporulé	Non sporulé	Non sporulé
Capsule	Non capsulé	Non capsulé	Non capsulé

·         Faire un état-frais (voir procédure M1002) qui permet de confirmer la mobilité par ciliature polaire.

·         Réalisation du test enzymatique de l’oxydase (voir procédure M2001) :

Ø  Si le test est positif, nous pouvons nous orienter vers le genre : Vibrio, Aeromonas, Pleisiomonas et Pseudomonas.

Ø  Si le test est négatif, nous pouvons nous orienter vers le genre : Enterobacterie, Acinetobacter et Stenotrophomonas (se reporter a la procédure M5002 : identification d’un bacille gram - oxydase -)

 

2.3 Galerie d’identification :

·         On ensemence la galerie d’identification suivante :

o    Gélose ordinaire,

o    Une gélose Viande Foie régénérée,

o    Une gélose HL + glucose,

o    API 20 NE

o    King A et B

 

2.4 Lecture de la galerie :

·         Résultats :

Type respiratoire :	AS	AAF
	Pseudomonas	Vibrio/Plesiomonas/Aeromonas

·         Caractères différentiels des genres Vibrio/Plesiomonas/Aeromonas :

Caractère	Orientation
Morphologie incurvée	Genre Vibrio
ADH-	Genre Vibrio
O129 résistant	Genre Aeromonas

·         Sérotypage pour les Vibrio cholera, deux sérovars responsables du cholera : O1 ET O139

·         Caractères d’identifications du genre Pseudomonas :

Milieu	King A	King B
	Pigment bleu	Pigment jaune/vert fluorescent sous lumière UV
Espèce	P. aeruginosa	Autres espèces de Pseudomonas fluorescents

·         Sérogroupage pour P. aeruginosa

3. Bibliographie

·         http://membres.multimania.fr/microbio/systematique/id1.html

·         Cours de microbiologie

4. Historique des modifications de ce textes :

DATES	Modifications apportées
Création du texte	2011_12_26
2011_12_26	Création du texte