Laboratoire

1. OBJET

Réalisation de la coloration de Gram

 
 2. MATÉRIELS UTILISÉS 

• Une lame
• Un bac à coloration
• Les colorants :
  • Violet de gentiane
  • Lugol
  • L'éthanol ( décolorant) 
  • Fuchsine

 3. MODE OPÉRATOIRE

• Faire un frottis sur une lame préalablement nettoyée
• Fixé le frottis à la chaleur ou à l'alcool
• Recouvrir le frottis avec le violet de gentiane. Laisser 1-5 minute
• Rincer à l'eau, puis plonger la lame dans le lugol. Laisser 30 sec- 1 minute
• Rincer à l'eau
• Décolorer avec l'alcool 30 secondes. Rincer
• Revoir le frottis avec la fuchsine. Laisser 1-5 minute. Rincer à l'eau
• Sécher le frottis

 4. INTERPRÉTATION

Les bactéries violettes : Gram+ qui ont une paroi de peptidoglycanes épaisses (ex : Bacillus)

Les bactéries roses : Gram- qui ont une paroi de peptidoglycanes fine (ex : Escherichia coli).

 

5. RÉSULTATS

                                 GRAM -                                                                                                        GRAM +
   

 

 6. LES DÉCHETS

 Après avoir observé le frottis, les lames sont jetées dans un bac à javel, et la suspension ayant servis à réaliser le frottis sera éliminer dans la poubelle à autoclave.

 

DATES
2011_09_06	Création par :jnj

ANCIENNE VERSION DE ROBIN-HACQUIN

Lycée Paul Éluard Avenue Jean Moulin 93206 SAINT DENIS	PROCÉDURE			RÉF : M1001
	La méthode de GRAM			Création : 16 mars 2009 Version : 1.0 Modifié : non modifié
Rédactrices  :Maëva ROBIN, Laura Hacquin		Vérificateur :	Approbatrices :
Date :  16 mars 2009 Visa		Date : Visa	Date :   Visa

1. OBJET

Décrire le déroulement de la coloration de Gram

2. MATÉRIELS UTILISÉS

• Un bac à coloration
• Les réactifs :
  • Violet de gentiane (cristal) ,
  • Lugol,
  • Éthanol,
  • Fuchsine
• Un frottis fixé sur lame

3. MODE OPÉRATOIRE

• Réaliser un frottis sur lame propre à l'aide d'une anse
• Fixer le frottis à la chaleur
• Immerger le frottis dans le violet de Gentiane pendant 1minute
• Rincer à l'eau distillée puis plonger dans le Lugol pendant 1minute
• Rincer à l'Éthanol (10 secondes) puis rincer a l'eau distillée
• Immerger dans la fuchsine diluée (1minute) et rincer a l'eau distillée
• Laisser sécher le frottis

4. RÉSULTATS-INTERPRÉTATION

Escherichia coli-Bacilles Gram-	Staphylococcus aureus-Coques Gram+

5. GESTION DES DÉCHETS

Les lames sont à jeter dans un bac spécial pour lame rempli d'eau de javel.

La souche bactérienne qui aura servi à faire le frottis sera éliminer dans un panier spécial qui sera ensuite autoclavé.

6. BIBLIOGRAPHIE

 

Nike Sneakers StoreSneakers