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 L'étuve à dioxyde de carbone doit permettre d'obtenir une atmosphère aérobie enrichie en dioxyde de carbone, atmosphère saturée en eau. Pour cela, un bac à eau est placé au bas de l'étuve et l'eau en s'évaporant peut ainsi assurer la saturation.

MAIS les champignons, en particulier les moisissures, adorent l'humidité pourvu qu'ils aient quelques substrats consommables : or quelques gouttes de milieu de culture des flasques suffit pour eux… Il faut donc veiller à ce qu'aucun champignon n'apparaisse et donc mettre de l'eau bouillie, nettoyer aussi souvent que nécessaire, ajouter un antimicrobien… Sinon apparaissent les moisissures comme cela a été le cas à la fin de nos cultures cellulaires (non touchées heureusement) :

 

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CMI en microplaque

À l'occasion de la formation de techniciens de laboratoire à Bangui en république centrafricaine, nous avons réalisé une manipulation classique, la mesure de la CMI à un antibiotique (amoxicilline injectable).
Le but sous-jacent de la manipulation est la réalisation de dilutions en série pour vérifier la capacité à bien pipeter et à suivre un protocole. Ce travail est classique en immunologie mais ici le cout est extrêmement faible car l'antibiotique ne vaut pas grand chose, le bouillon nutritif et la souche non plus !

La souche utilisée est un E. coli banal.
L'antibiotique est du Clamoxyl injectable (flacon de 1 g, solution utilisée de 256 µg/mL)

Résultats :

La ligne A montre un erreur grossière
La ligne C est correcte.

Quand un stagiaire se trompe, il est possible de faire faire, vu les lignes vides (la conservation de la plaque pour des tp ultérieurs n'étant pas souhaitable au vu des bactéries vivantes de la plaque…), une série de dilutions au 1/2 d'un colorant concentré pour l'entrainer aux dilutions (pour un cout nul) :

Bonne lecture…

 

 

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Une observation au laboratoire…

Une pissette d'eau "distillée" (permuttée ou désionisée) montre une coloration verte surprenante… difficile à éliminer !

Au microscope, on découvre évidemment des microalgues (avec des bactéries).

Mais comment ces algues peuvent-elles se multiplier dans un milieu théoriquement sans ions minéraux !

À vos hypothèses…

 

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Une surprise sur Chapman

À l'occasion d'un TP sur Cryptococcus neoformans, nous avons eu la malchance d'avoir une souche contaminée par un Bacillus.
Un isolement était prévu du mélange Staphylococcus etCryptococcus neoformans sur Chapman et GO.

Le lendemain, voici la gélose obtenue :

Vu l'aspect des colonies, il nous semblait évidemment que nous avions retrouvé nos Cryptococcus neoformans ! La mucosité était très trompeuse…

Malheureusement, le gram sur les petites comme les grosses colonies révèle des Bacillus

Autre fait troublant : sur gélose ordinaire, le Bacillus apparait hypersporulé, et sur Chapman ne présente aucune spore (dans les mêmes délais)

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Les bétalactamases à spectre élargi/étendu, donnent des images très classiques de bouchon de champagne entre les disques de type Céphalosporine de 3e génération et un disque contenant de l'acide clavulanique. Il n'est pas facile d'expliquer de telles images…

Voici une proposition pour tenter de comprendre :

 
En haut, pour E. coli (merci à Mélanie Dufaux pour l'image), les zones où les cercles se rejoignent représentent en violet la zone où l'acide clavulanique est efficace. Ces cercles ont le même diamètre… montrant donc que l'acide clavulanique agit à la même concentration. Le positionnement pour le disque de CTX (entouré d'orange) est le même par rapport aux autres disques.
En bas, le cercle rouge montre là aussi l'acide clavulanique. Le croisement des disques violet et rouge montre aussi l'action conjointe des deux molécules.
On peut donc penser que c'est bien l'acide clavulanique qui est en cause et déclenche la synergie : il inhibe la BLSE permettant, dans la zone d'intersection, l'action de l'autre antibiotique (la C3G).
 
 
À vos critiques…

 

 

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