Lycée Paul Éluard 15 Avenue Jean Moulin 93206 SAINT DENIS | Procédure | Réf : 0001 page 2 / 3 | ||
Identification d'un bacille Gram - oxydase - | Dates Version : 0.1 | |||
Rédacteur : Sraouia Mohamed | Vérificateur: ETIENNE Nelly | Approbateur : | ||
Date : 2012_01_13 Signature : | Date : 2012_05_21 Signature : | Date : Signature : |
Objet
À partir d'une suspension mono microbienne on procède à l'identification des bactéries Gram- oxydase. Si la suspension est polybactérienne, il faudra alors isolé sur une milieux sélectif des Gram- : Drigalski ou EMB.
1. Protocole d'orientation (Jour 1)
Rappel : Protocole à réaliser seulement à partir d'une souche mono bactérienne
2.1. Réalisation du Gram et de l'état frais (examen microscopique):
Réaliser une coloration sur un frottis à partir d'une suspension ou d'une gélose sélective des Gram -. Pour la réalisation de la coloration se référer à la procédure M1001.
On observe alors des bacilles Gram – (parfois cocobacillaire), non sporulés.
Réaliser un état frais à partir de la suspension pour déterminer le mouvement et le groupement de l'espèce (cf protocole M1002)
2.2. Réalisation de de l'oxydase
Présence de bacilles gram -, il faut réaliser la recherche de l'enzyme : l'oxydase selon le protocole M2001.
Présence de coloration rose violacée: Oxydase+
Absence de coloration rose violacée : Oxydase - (image de l'oxydase)
2.3 Orientation du premier jour et galerie d'identification
Bacilles Gram -, oxydase - , non exigeante. Donc on s'oriente vers la famille des ENTEROBACTERIACEAE et le genre Stenotrophomonas, Acinetobacter
On ensemence alors :
Une gélose ordinaire pour déterminer l’exigence et la pureté de la souche.
Une gélose viande foie pour le type respiratoire.
Un milieu Hugh et Leifson pour la voie d'attaque du glucose.
Un bouillon nitraté pour la recherche de la nitrate réductase
Une galerie d'identification.
2. Protocole d'identification (Jour 2)
2.1 Lecture des milieux
Vérifier la pureté de la souche : S'assurer d'avoir un seul type de colonie sur la gélose ordinaire. Si la souche est pure la lecture des milieux et l'identification peut être réaliser.
L'exigence de la bactérie : Les espèces Gram – les plus rencontrées sont essentiellement des souches non exigeantes.
Le type respiratoire : Déterminer le type respiratoire selon le niveau et le lieu de la culture ( aérobie, anaérobie, aéro-anaérobie)
Si la souche est aérobie stricte : identification du genre Stenotrophomonas
La voie d'attaque du glucose : Déterminer la voie d'attaque du glucose selon la couleur du milieu et la zone d'acidification
La recherche la nitrate réductase : Lecture après l'ajout des réactifs N1 et N2. On observe une coloration rouge du milieu en cas de présence de l'enzyme. Si pas de coloration ajout du zinc.
NR+ NR-
La lecture de la galerie miniaturisée (Api 20E) : lecture de la microgalerie et détermination de l'espèce soit à partir du tableau taxonomique ou un logiciel d'identification (il est nécessaire de confirmer l'identification numérique par une identification du technicien caractère par caractère).
2.2 Identification
Rendre l'identification :
- identifier la famille ou le genre.
- identifier l’espèce
- antibiogramme
- conclure selon le cas clinique.
2.3 caractères antigéniques
Permet d'identifier précisément le sérovar et rendre une identification plus complète.
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2012_01_13 |
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Lycée Paul Éluard SAINT-DENIS
ANCIENNE VERSION
Lycée Paul Éluard | PROCÉDURE | RÉF : M5002 | ||
Identification d'un bacille gram - oxydase - | Création date | |||
Rédacteur : HACQUIN Laura | Vérificateur : jnj | Approbatrices : | ||
Date : 2010_04_06 | Date : Visa | Date : Visa |
1. OBJET
Les bactéries gram - sont mise en évidence par la coloration de gram. Elles apparaissent rose au microscope. Cette coloration est déterminante dans la classification bacterienne.
L'oxydase est une enzyme. Ce test permet de mettre en évidence la présence ou non de cette enzyme par la bactérie.
2. DÉMARCHE
1. Examens microscopique:
- coloration de gram
- état frais
2. Examens macroscopiques:
- test enzymatique: on réalise l'oxydase car la bactérie est gram négatif.
3. BIBLIOGRAPHIE
http://fr.wikipedia.org/wiki/Gram_n%C3%A9gatif
http://fr.wikipedia.org/wiki/Oxydase
4. HISTORIQUE
(indiquer dans le tableau les modifications réalisées. Mettre les éléments avec le dernier en HAUT. Respectez le format de date : ANNEE_MOIS_JOUR)
DATES | |
2010_05_04 | Modification par hacquin laura |
2010_03_13 | Création par hacquin laura |