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1. Principe

La galerie API 20 NE se compose de 20 micro-tubes contenant milieux et substrats sous forme déshydratée. Il permet l’identification des bacilles gram (-) non entérobactéries par la réalisation rapide et facile de tests biochimiques miniaturisés. Il y a une partie pour l’auxanogramme et une autre pour le zymogramme (les bactéries cultivent seulement si elles sont capables d’utiliser le substrat correspondant). Les réactions produites durant la période d’incubation se traduisent par des virages colorés spontanés ou révélés par l’addition de réactifs.

2. Technique

2.1. Matériaux :

- Galerie miniature API 20 NE

- Pipette pasteur stérile

- Bec Bunsen

- Huile de vaseline

- Eau distillée stérile (ou « Suspension Medium » 5 mL).

- Ampoule AUX Médium

- Réactifs : Chlorure de Fer III, Réactif de Kovacs (ou James), NaOH ou KOH (VP1), Napht-1-ol (VP2), Acide sulfanilique, Naphtyl-1-Amine et poudre de zinc si nécessaire.

2.2. Préparation de la galerie :

- Répartir de l’eau dans les alvéoles pour créer une atmosphère humide.

- Inscrire les références de la souche bactérienne sur la languette latérale de la boîte (+ date et initiales de l’opérateur).

- Déposer stérilement la galerie dans la boîte d’incubation.

2.3. Préparation de l‘inoculum :

Faire une suspension bactérienne, dans une ampoule de NaCl 0,85% Medium ou dans un tube d’eau distillée stérile, de turbidité égale à celle de l’étalon 0,5 Mcfarland.

2.4. Inoculation de la galerie :

- Remplir uniquement les tubes des tests (et non les cupules) NO3 à PNPG avec la suspension bactérienne.

- Eviter la formation de bulles.

- Créer une anaérobiose dans les tests GLU, ADH, URE en remplissant leur cupule d’huile de paraffine.

- Transférer 200 μl (4 à 8 gouttes) de la suspension précédente, dans une ampoule AUX Medium.

- Homogénéiser.

- Remplir les micro-cupules des tests GLU à PAC.

- Remplir tubes et cupules des tests GLU à PAC en veillant à créer un niveau horizontal ou légèrement convexe, mais jamais concave.

- Refermer la boîte d’incubation et la placer dans l’étuve à 37° C pendant 24 heures.

3. Lecture

Après incubation, la lecture de ces réactions se fait à l’aide du tableau de lecture ci-dessous :

Résultat +                Résultat -

4. Identification

• Avec le catalogue analytique :

Les tests sont regroupés en groupe de 3, et une valeur (1,2 ou 4) est indiquée pour chacun. Additionner à l’intérieur de chaque groupe les nombres correspondants aux tests positifs. On obtient un nombre 7 chiffres qui sert de code d’identification.

• Avec un logiciel d’identification

Historique des modifications de ce texte :

DATE :	Modifications apportées
2009_04_08	Création du texte

 

ANCIENNE VERSION 

Lycée Paul Éluard Avenue Jean Moulin 93206 SAINT DENIS	PROCÉDURE			RÉF : M3002
	Galerie API20NE			Création date: 2010_04_2010 Version : 1.2 Modification : date
Rédacteur :DIAWARA Gatta		Vérificateur :	Approbatrices :
Date : 2010_04_06		Date : Visa	Date : Visa

1. OBJET

La galerie API 20 NE se compose d’une galerie constituée de 20 microtubes contenant milieux et substrats sous forme déshydratée.
Les tests conventionnels sont inoculés avec une suspension bactérienne saline qui reconstitue les milieux.
Les réactions produites durant la période d’incubation se traduisent par des virages colorés spontanés ou révélés par l’addition de réactifs.
Les tests d’assimilation sont inoculés avec un milieu minimum et les bactéries cultivent seulement si elles sont capables d’utiliser le substrat correspondant.
La lecture de ces réactions se fait à l’aide du Tableau de lecture et l’identification est obtenue à l’aide du tableau d’identification.

2. DÉMARCHE

· Préparation de la galerie : Mettre de l'eau distillée sur le fond de la boîte ,toutes les alvéoles doivent être remplies, éliminer ensuite l'excès d'eau
Déposer stérilement la galerie dans la boîte d’incubation.
· Préparation de la suspennsion :
Faire une suspension bactérienne, dans une ampoule de NaCl 0,85% Medium ou dans un tube
d’eau distillée stérile, de turbidité égale à celle de l’étalon 0,5 Mcfarland.
· Inoculation de la galerie :

Remplir les tubes (et non les cupules) des tests NO3 à PNPG avec la
suspension précédente. Eviter la formation de bulles.

Transférer 200 μl (4 à 8 gouttes) de la suspension précédente, dans une
ampoule AUX Medium. Homogénéiser.

Remplir les tubes et cupules des tests GLU à PAC.

Remplir d’huile de paraffine les cupules des trois tests GLU, ADH, URE.

3. BIBLIOGRAPHIE

4. HISTORIQUE

(indiquer dans le tableau les modifications réalisées. Mettre les éléments avec le dernier en HAUT. Respectez le format de date : ANNEE_MOIS_JOUR)

DATES
2010_03_13	Création par :

 

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