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Gestion des procédures


Lycée Paul Éluard

15 Avenue Jean Moulin

93206 SAINT DENIS

Procédure

Réf : 0001

 

COLORATION DE GRAM

Dates

Création : 2011_11_26

Version : 0.1

Modifié :2011_12_24

Rédacteur : ÉTIENNE Nelly

Vérificateur

Approbateur :

Date : 2011_12_23

Signature :

Date :

Signature :

Date :

Signature :

1. OBJET

Réalisation de la coloration de Gram

 
 2. MATÉRIELS UTILISÉS 

  • Une lame
  • Un bac à coloration
  • Les colorants :
    • Violet de gentiane
    • Lugol
    • L'éthanol ( décolorant) 
    • Fuchsine

 3. MODE OPÉRATOIRE

  • Faire un frottis sur une lame préalablement nettoyée
  • Fixé le frottis à la chaleur ou à l'alcool
  • Recouvrir le frottis avec le violet de gentiane. Laisser 1-5 minute
  • Rincer à l'eau, puis plonger la lame dans le lugol. Laisser 30 sec- 1 minute
  • Rincer à l'eau
  • Décolorer avec l'alcool 30 secondes. Rincer
  • Revoir le frottis avec la fuchsine. Laisser 1-5 minute. Rincer à l'eau
  • Sécher le frottis

 4. INTERPRÉTATION

Les bactéries violettes : Gram+ qui ont une paroi de peptidoglycanes épaisses (ex : Bacillus)

Les bactéries roses : Gram- qui ont une paroi de peptidoglycanes fine (ex : Escherichia coli).

 

5RÉSULTATS

                                 GRAM -                                                                                                        GRAM +
   

 

 6. LES DÉCHETS

 Après avoir observé le frottis, les lames sont jetées dans un bac à javel, et la suspension ayant servis à réaliser le frottis sera éliminer dans la poubelle à autoclave.

 

DATES

 

 

 

 

 

 

 

2011_09_06

Création par :jnj


ANCIENNE VERSION DE ROBIN-HACQUIN


Lycée Paul Éluard

Avenue Jean Moulin

93206 SAINT DENIS

PROCÉDURE

RÉF : M1001

La méthode de GRAM

Création : 16 mars 2009

Version : 1.0

Modifié : non modifié  

Rédactrices  :Maëva ROBIN, Laura Hacquin

Vérificateur :

Approbatrices :

Date :  16 mars 2009 Visa

Date : Visa

Date :   Visa

1. OBJET

    Décrire le déroulement de la coloration de Gram

2. MATÉRIELS UTILISÉS

  • Un bac à coloration
  • Les réactifs :
    • Violet de gentiane (cristal) ,
    • Lugol,
    • Éthanol,
    • Fuchsine
  • Un frottis fixé sur lame

3. MODE OPÉRATOIRE

  • Réaliser un frottis sur lame propre à l'aide d'une anse
  • Fixer le frottis à la chaleur
  • Immerger le frottis dans le violet de Gentiane pendant 1minute
  • Rincer à l'eau distillée puis plonger dans le Lugol pendant 1minute
  • Rincer à l'Éthanol (10 secondes) puis rincer a l'eau distillée
  • Immerger dans la fuchsine diluée (1minute) et rincer a l'eau distillée
  • Laisser sécher le frottis

4. RÉSULTATS-INTERPRÉTATION

Escherichia coli-Bacilles Gram-

Staphylococcus aureus-Coques Gram+

5. GESTION DES DÉCHETS

Les lames sont à jeter dans un bac spécial pour lame rempli d'eau de javel.

La souche bactérienne qui aura servi à faire le frottis sera éliminer dans un panier spécial qui sera ensuite autoclavé.

6. BIBLIOGRAPHIE